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タイトル Sin2 Smooth G live at Bj Barry Show Metzingen 動画 動画の種類 ライブ動画 解説・備考 特に解説したいことがあれば記入してください。 ☆複数トークボクサーが参加している場合は、タグにご入力下さい。☆ この動画に対するコメント 名前 コメント
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SurfaceView 以外のクラスから画像を表示させる ゲーム製作では Character のクラスで画像の生成を行いたい。 しかし、Character クラスを SurfaceView や Activity クラスから extends すると、エラーになる。 そこで、Activity から SurfaceView を通して、Character へ Context を渡してやり、画像を取得する。 import android.app.Activity; import android.os.Bundle; public class GameActivity extends Activity { @Override public void onCreate(Bundle savedInstanceState) { super.onCreate(savedInstanceState); setContentView(R.layout.main); //Contextを渡してる setContentView(new SampleSurfaceView(this)); } } import android.content.Context; import android.content.res.Resources; import android.graphics.Bitmap; import android.graphics.BitmapFactory; import android.graphics.Canvas; import android.graphics.Color; import android.graphics.Paint; import android.view.SurfaceHolder; import android.view.SurfaceView; import android.view.SurfaceHolder.Callback; public class SampleSurfaceView extends SurfaceView implements Callback, Runnable { private SurfaceHolder mholder; private Thread mLooper; Resources res = this.getContext().getResources(); Bitmap image = BitmapFactory.decodeResource(res, R.drawable.chra_stand_00); Context myContext; Character C; public SampleSurfaceView(Context context) { super(context); mholder = getHolder(); //callbackメソッドを登録 mholder.addCallback(this); //フォーカスを当てる(必要かよく分からない) setFocusable(true); myContext=context; } @Override public void run() { Canvas canvas = null; //ここで Character 初期化。contextとcanvasを渡す C=new Character(myContext,canvas); //画面に描画 canvas = mholder.lockCanvas(); doDraw(canvas); mholder.unlockCanvasAndPost(canvas); } } private void doDraw(Canvas canvas){ Paint paint = new Paint(); //描画処理(Lock中なのでなるべく早く) canvas.drawColor(Color.BLACK); canvas.drawBitmap(C.getImage(), 0, 0, paint); } } import android.content.Context; import android.content.res.Resources; import android.graphics.Bitmap; import android.graphics.BitmapFactory; import android.graphics.Canvas; public class Character{ Bitmap img0; public Character(Context context,Canvas canvas) { Resources res = context.getResources(); img0 = BitmapFactory.decodeResource(res, R.drawable.ファイル名); } public Bitmap getImage() { // 画像を返す return img0; } }
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25/Nov/2011 probeの解離定数を求める。 I am gonna determine Kd value. 2 units/ml Bc-PLC 2/5 units/ml Bc-PLC 2/5*5 units/ml Bc-PLC 2/5*5*5 units/ml Bc-PLC 2/5*5*5*5 units/ml Bc-PLC 2/5*5*5*5*5 units/ml Bc-PLC 2/5*5*5*5*5*5 units/ml Bc-PLC 2/5*5*5*5*5*5*5 units/ml Bc-PLC 0 units/ml Bc-PLC At the same time, I am gonna determine real amount of DAG level by brigh and dyer method. 18/Nov/2011 SMの量におけるD609の影響をMDCK細胞で調べる。 Effect of D609 on SM level in MDCK cells 1)ctrl 2)SMase 3)3hour D609 incubation 4)6hour D609 incubation 5)20hour D609 incubation mCherry-lysenin conc is 50microg/ml. 1 30 3hour 4 30 6hour 6 00 20hour SMase 1 units/ml 10 min. After that, fixed. What I have to prepare is that HBSS and 3 % PFA Effect of DGAT inhibitor on DAG level in MDCK cells. 1microM A922500 was used for this experiment. 2pm Add A922500 start incubation 4pm Add A922500 start incubation 5pm DAG probe incubation. こんなかんじで 17/Nov/2011 Rat red blood cell experiment, At first, I did the experiment as follows 1)1U/ml Pc-PLC + 200times annexin V + 9*108 cell/ml result hemolysis within 4 min 2)0.1U/ml Pc-PLC + 40 times annexin V + 9*108 cell/ml result hemolysis within 5 min In this time, protocol was wrong. 3)real experiment 0.1U/ml Pc-PLC + 40 times annexin V + 9*108 cell/ml I get annexin V fluorescence but it is not for living RBL cells. At first, RBC was subjected to hemolysis, become ghost, and then become fluorescence. 4)0.1U/ml Bc-PLC + 40 times annexin V + 9*108 cell/ml RBC rarely give hemolysis and no fluorescence. And I tryed the experiment whether Bc-PLC makes DAG on the plasma membrane in RBC in a Bc-PLC conc. dependent manner. 1) 800 microl RBC (9*108 cell/ml) 2) Add DAG probe 24 microl here And 3)2microl 100 units/ml Bc-PLC was added to the 8 microl HBSS. 4)2microl of this solution was added to next tube, which has 8 microl HBSS. 5)this step is done one after another. this means that 5 time solution is gonna prepare. Next in each tube, 75 microl RBC solution was added and is incubated for 10 min @r.t. after that, fixed 6% (final 3%), and incubated for 15min. and spin down. こんな感じでやりましたよーん。 30/Oct/2011 D609の濃度 50microg/ml Offered as 5 mg (sc-201403) and 25 mg (sc-201403A) sizes Synonym O-Tricyclo[5.2.1.02,6]dec-9-yl dithiocarbonate potassium salt CAS Number 83373-60-8 Molecular Weight 266.5 Molecular Formula C11H15OS2K Purity 98% Physical Appearance Off-white solid Solubility Soluble in water (25 mg/ml) I used D609 with the concentration of 188microM 以下のものをやってみる。 Other experiments 1. living MDCK cells with alpha PMA and PMA 2. DAG probe calibration with Bc-PLC Bc-PLC 20 units/ml Bc-PLC 10 units/ml Bc-PLC 5units/ml Bc-PLC 0units/ml D609 3. fixed MDCK cells with SMase noSMase SMase SMase+D609 SMase+BcPLC 4. living MDCK cells with SMase + Bc-PLC 5. SM amount with SMase or nojirimycin 6. DAG amount with SMase or nojirimycin 111016 もう一度最後の実験 以下の実験を2回繰り返す。 それぞれについて10個の細胞をとる。 それでanalyzeして終わり。 Thinking about biological significance, I am gonna try this experiment as follows. 1. noSMase 2. SMase 3. SMase+D609 4. SMase+BcPLC 16/June/2011 Now I started to write the papers. But I have several experiments I have to do and I want to do. 1. test if the DAG which exist already on the membrane is abolished by incubated with D609. 2. I am gonna take beautiful data of cholesterol, DMS and NB-DNJ. SMS2がPC-PLCであるか否か?とういうことに関係するのですが、 D609処理した細胞で、ライセニンで染まるかどうかという実験を過去にラボでやった人はいらっしゃいますか? あと、SMS1およびSMS2が欠損したMEF-ZS2とSMS1もしくは、SMS2が発現させた細胞では、ライセニンで染めるとどのように違いがでますか? こちらについては、やっているのではないかと思い聴いて見ました。 And then I want to get the PC-PLC antibody. 20May2011 I am gonna do the experiment. I don t miss to write but in the previous experiment. UV was irradiated to MDCK cells for 1 min. 30 min, 1hour 2hout later, the cells were fixed and observed. 30min there is 30% cells in which DAG probe was translocated. But not so obvious. So I am gonna do 10 min incubation after UVB irradiation. Because some papers says that 10 min is more DAG. So, 1. UVB 10min 2. UVB D609 10 min 3. No UVB And then the previous experiment that when MDCK was fixed, DAG probe localized at the plasma membrane incubated with 12.5 Bc-PLC 10 min. So, I need to play around the concentration of Bc-PLC. 4. Bc-PLC 0 microunit/ml 5. Bc-PLC 0.1 microunit/ml 6. Bc-PLC 0.5 microunit/ml 7. Bc-PLC 1 microunit/ml 8. Bc-PLC 5 microunit/ml 9. Bc-PLC 12.5 microunit/ml And then, U73122 doesn t abolish ATP-induced DAG on the outer leaflet of plasma membrane. So, I suspect PAP-induced DAG. I am gonna use the propranolol. 10. ctrl 11. D609 12. D609+ATP 13. D609+ATP+propranolol At the same time, I am gonna use the MDCK cells expressing mGluR5 and bath application of glutamate. 14. ctrl 15. glutamate 06May2011 I gonna do the experiment about DAG flip in fixed cells. A. EYFP-C1AB and DsRed B. EYFP-C1AB and DsRed with 10mM MbCD + 12.5unit/ml BcPLC C. EYFP-C1AB and DsRed with 20microM Fumonisin B1 + 12.5unit/ml BcPLC D. EYFP-C1AB and DsRed with 50nM ISP1 + 12.5unit/ml BcPLC E. EYFP-C1AB and DsRed with 6 microM DMS + 12.5unit/ml BcPLC F. EYFP-C1AB and DsRed with 100 microM NB-DNJ + 12.5unit/ml BcPLC G. EYFP-C1AB and DsRed with Bc-PLC as ctrl H. EYFP-C1AB and DsRed with PMA 28Apr2011 How to irradiate UVB (290-320nm) 1. reduce the volume of medium, DMEM 100 microl. Go to program 2. Set 10 mJoules/cm2 for 1min 3. replace the medium with appropriate media. That s it. 27Apr2011 Now Francoise kindly decide the condition of UVB irradiation. So I am doing the following experiments under the condition. I will observe DG probe and PKCdelta antibody accumulation. 1. Ctrl(negative) Just MDCK cells. 2. Ctrl(positive) PMA 3. UBV and leave 30 min 4. UBV and leave 1 hour 5. UBV and leave 3 hour 7. UBV and leave 30 min with D609 (D609 nothing after UVB) 8. UBV and leave 1 hour with D609 (D609 nothing after UVB) 9. UBV and leave 3 hour with D609 (D609 nothing after UVB) 10. UBV and leave 3 hour with D609 (D609 still incubation after UVB) 11. no D609 12. D609+100microM ATP 13. D609+100microM ATP+1microM U73122 22Apr2011 Thinking about the experiment I have to do. 1. I can get PKCgamma antibody within next week. So I gonna do the following experiment. A. EYFP-C1AB, PKCgamma antibody, DsRed. B. EYFP-C1AB, PKCgamma antibody, DsRed with SMase. C. EYFP-C1AB, PKCgamma antibody, DsRed with SMase and D609. 2. check whether DAG flop is inhbited in the presence of U73122. Actually when I did this expeirment previously using 100 microM U73122, unexpectedly more bright fluorescence comes up. Maybe some artifact. So I gonna reduce the concentration of U73122. A. 100 microM ATP B. 100 microM ATP, 10 microM U73122 C. 10 microM ATP D. 10 microM ATP, 10 microM U73122 3. I am gonna observe the effect of MbCD, FumonisinB1, ISP1, DMS and NB-DNJ in fixed cells. A. EYFP-C1AB and DsRed B. EYFP-C1AB and DsRed with 10mM MbCD + 12.5unit/ml BcPLC C. EYFP-C1AB and DsRed with 10microM(?)Fumonisin B1 + 12.5unit/ml BcPLC D. EYFP-C1AB and DsRed with 50nM ISP1 + 12.5unit/ml BcPLC E. EYFP-C1AB and DsRed with 6 microM DMS + 12.5unit/ml BcPLC F. EYFP-C1AB and DsRed with 100 microM NB-DNJ + 12.5unit/ml BcPLC 07Apr2011 Thinking about discussion with Francoise. 1. I am giving Francoise MDCK cells. 2. I gonna show the paper I am preparing now. 3. I gonna give her D609, rottelin Reiko has. 4. I gonna give her the paper relationship with D609 and apoptosis, with rottelin and apoptosis, and MDCK and apoptosis, SMase and apoptosis. 25/Mar/2011 Thinking about biological significance, I am gonna try this experiment as follows. 1. noSMase 2. noSMase+U73122 3. noSMase+D609 4. SMase 5. SMase+U73122 6. SMase+D609 7. SMase+BcPLC 8. SMase+BcPLC+U73122 Express EYFP-C1AB, DsRed and PLCepsilon-HA Express EYFP-C1AB, DsRed and PLCepsilon-HA(dominega) Express EYFP-C1AB, DsRed and PLCalpha-HA Express EYFP-C1AB, DsRed and PLCalpha-HA(dominega) 24/Mar/2011 And then, I found another contraversy. In IPS1 experiment, flip doesn t occure even though without SM. I need to do same experiment with SMase. 22/Mar/2011 I am gonna do the following experiments from the data I took on 15/Mar/2011. At first, 10 microM U73122 experiment doesn t work. So I am gonna do increase its concentration or decreases in ATP concentration. This experiment is very critical to say that the EYFP-C1AB fluorescence is caused by DAG drived from PI-PLC. 1. 100 microM ATP 2. 100 microM ATP, 100 microM U73122 3. 100 microM ATP, 100 microM U73343 4. 10 microM ATP 5. 10 microM ATP, 100 microM U73122 6. 10 microM ATP, 100 microM U73343 Another point I have to mention is that 24 hour incubation with U73122 did not give the difference in outer DAG signal compared to ctrl. This means that PI-PLC doesn t contribute to outer DAG. But, I can see PI-PLC dependent outer DAG sigal. So I want to make clear the signal from PI-PLC caused by ATP addition is transient or sustained. I guess this signal is transient. I am gonna do 10min, 30min, 1 hour, 2 hour. In some case I am gonna remove the ATP in the middle of reaction. 15/Mar/2011 I am gonna take reproduciblity. 1. MDCK Cameleon with ATP no D609 2. MDCK Cameleon with ATP with D609 3. MDCK control no D609 4. MDCK D609 only 5. MDCK D609 ATP 6. MDCK D609 ATP U73122 7. MDCK D609 ATP U73343 8. MDCK D609 ATP R59949 9. MDCK D609 ATP SMase 10. MDCK D609 PMA 11. MDCK D609 DiC8 12. MDCK C1AB inner no D609 13. MDCK C1AB inner no D609 ATP 14. MDCK C1AB inner D609 15. MDCK C1AB inner D609 ATP 16. MDCK mGluR no D609 17. MDCK mGluR D609 18. MDCK mGluR D609 Result Patially success. I got good result about that in the presence of D609 and ATP the DAG signal was detected, but no signal in the presence of D609 only. Of course, no D609 gives very bright fluorescence. But disappointed point is that U73112 did not inhibit the fluorescence which is caused by addition of ATP. Interpretation of it is due to week effect of U73122. I need to increase in concentration of U73122 or decrease of concentration of ATP. And then, the points I need to condider is that in the presence of U73122, which is 24 hours incubation, DAG signal did not decreases. But transient increase caused by inner DAG caused by ATP through PI-PLC is detected. How do I come to term with these. 09/Mar/2011 The idea to observe DAG flop. 1. no D609 2. ctrl 3. ATP 10 min 4. ATP U73122 10 min 5. ATP R59949 10 min 6. ATP SMase 10 min 7. PMA 10 min 8. DiC8 10 min 9. Inner C1AB ATP 10.Inner C1AB ATP 1. About 9 and 10, C1AB is transfected one day before. 2. 2-10 is incubated with D609 for 6 hours. 3. 1067microl(97times11)HBSS is prepared 4. 33microl C1AB is put, means total 1100microl 5. 100microl pick up. Number1 6. 4microl D609 is put, total 1004 microl 7. Divide in half 8. first half, 5 microl ATP is added. 9. 100 microl pick up. Number2. 10. From remaining 400microl, each 100 microl is taken, add 1 microl PMA(10microM) and 1 microl DiC8 (100microM).Number 7 and Number 8. 11. About second half, 4microl ATP is added. 12. 100microl is picked up, Number3. 13. 1 microl U723122(15microM), R59949(10microM) or 2microl SMase(1unit) is added to each 100 microl, Number 4,Number5 and Number 6. Result In some part it is works well. But I missed to enter D609 in the cell which was supposed to be in the presence of U73122. So I need to do again about U73122. And My concern is C1AB probe expressed into the cells localized to the membrane in the presence of only D609. I need to chech this is really real or not. And I would be better to confirm that P2Y2R stay on the surface on the plasma membrane, by doing measure increase in calcium concentration. c 04/Mar/2011 I prepared WR19L cells, lymphocyte. I am gonna do the following experiments. I am gonna add 10 microM PMA, 100 microM DiC8, 12.5 units/ml Bc-PLC, 10 microM C6-Cer mixed with EYFP-C1AB probe. Experimental procedure WR19Lcells were spind down and collected. Cells were in total 815 microl(163microl*5 in each)HBSS solution. Add 25microl 3.8mg/ml EYFP-C1AB. 2microl 1mM PMA, 1mM alphaPMA, 100mM DiC8, 8.5microl of 12.5unit/ml Bc-PLC are put in the 1.5 ml tubes in advace. 168microl solution containing EYFP-C1AB is added in each tube and incubate 10 min. 30micro 20% PFA is added and fix for 10 min. After that, spine down cells and remove supernatant. Add 50mM NH4Cl for 5min. Spine down and suck up supernatant. Add 100microl HBSS. Result I could do it! I can see brighter fluorescence in PMA than that in control.About DiC8, It seems that there is no difference compared to control.About Bc-PLC, I could see very bright fluorescence in the cells which is aggregated, indicating that DAG is important for membrane fusion. 04/Mar/2011 I prepared WR19L cells, lymphocyte. I am gonna do the following experiments. I am gonna add 10 microM PMA, 100 microM DiC8, 12.5 units/ml Bc-PLC, 10 microM C6-Cer mixed with EYFP-C1AB probe. Experimental procedure WR19Lcells were spind down and collected. Cells were in total 815 microl(163microl*5 in each)HBSS solution. Add 25microl 3.8mg/ml EYFP-C1AB. 2microl 1mM PMA, 1mM alphaPMA, 100mM DiC8, 8.5microl of 12.5unit/ml Bc-PLC are put in the 1.5 ml tubes in advace. 168microl solution containing EYFP-C1AB is added in each tube and incubate 10 min. 30micro 20% PFA is added and fix for 10 min. After that, spine down cells and remove supernatant. Add 50mM NH4Cl for 5min. Spine down and suck up supernatant. Add 100microl HBSS. 18/Feb/2011 I am gonna follow Malhotra s procedure. I prepared the liposomes as follows. 1. POPC only=60 2. POPC/PS=60/20 3. POPC/GM1=60/20 These liposome includes 2mol% Rhodamine-PE 1. POPC(0.2micromol) avanti 13.7mM 14.6microl 2. PS(0.04microl)avanti 100721 2.3mM 0.45 microl 3. GM1(0.04micromol) sigma G7641 1mM 1.128 microl 4. Phodamin-PE(4nmol) Avanti 0.15 mM 28 microl 1. I diluted these liposomes in 666microl, 888microl, 888microl in each. This means that 300 microM liposomes. 2. I am gonna pick up 100 microl in each. 3. EYFPC1AB domain is 1 mg/ml I am gonna add 1microl into 100 microl. This means that 10 microg/ml. 4. About DiC8, I have 1M DiC8 now (DMSO). I am gonna dilute this solution 200 times(PBS(-)), this means 5mM. Add 1microl into 100 microl. I want to prepare as follow. A. POPC B. POPC+probe C. POPC+probe+DiC8 D. POPC/PS E. POPC/PS+probe F. POPC/PS+probe+DiC8 G. POPC/GM1 H. POPC/GM1+probe I. POPC/GM1+probe+DiC8 5. FRET mesurement.30 min incubation. excitation 488 nm emission 500-650nm 6. Flotation assay (I can only use 4 samples for ultracentrifugation) B. POPC+probe C. POPC+probe+DiC8 H. POPC/GM1+probe I. POPC/GM1+probe+DiC8 7. Normalize with fluorescence of liposomes. 8. Apply sample solution to SDS-Page. 9. Stain with GFP antiboly. 06/Feb/2011 I couldn t make liposomes previously in 03/Feb/2011. However, I leave these lipid films for 1 week in the room condition. This might cause some bad effect on these membranes. So, I gonna make liposome again with same condition with littele modification. Because previous study use fluorescence PE was used 2mol%. I am gonna increase the volume of Rhodamine-PE from 0.5 to 2 mol%. So, 1. POPC only 2. POPC/DAG=60/6 3. POPC/DAG/GM1=60/6/20 4. POPC/DAG/PS=60/6/20 5. POPC/PS=60/20 6. POPC/GM1=60/20 Phodamine-PE is inluded all 2 mol%. 1. POPC(0.2micromol) avanti 13.7mM 14.6microl 2. PODG(0.033micromol) avanti 800815C 3.4 mM 9.8 microl 3. PS(0.04microl)avanti 100721 2.3mM 0.45 microl 4. GM1(0.04micromol) sigma G7641 1mM 1.128 microl 5. Phodamin-PE(4nmol) Avanti 0.15 mM 28 microl So then, I am gonna prepare following. 1. Take 102 microl POPC and 196 microl PE. 2. Mix and take 42.6 microl each in 6 tubes. 3. 9.8microl DAG is added 2,3,4 tubes. 4. 1.1microl GM1 is added 3,6 tubes. 5. 0.5microl PS is added 4,5 tubes. result I try sonication extensivly. But didn t make liposomes containing DAG even though biophysical journal paper shows that they could make liposomes. 03/Feb/2011 Lipid filmes prepared in 20/Jan/2011 was voltexed. But 5,6 didn t make liposomes. 2,3,4 did but rim of glass tube have fluorescence lipids, I am afraid of phase separation of DAG on the glass tube. Only 1 made liposomes well. 20/Jan/2011 I did the experiment of 09/Jan/2011 But this experiment didn t work well. Even positive control didn t work well, which is same result of ctrl. Toshi-sensei said that the distance between fluorescent PE and EYFP-C1AB doesn t become close enough. So I am gonna give up this experiment. I am gonna do following expeiment. I will prepare following liposomes. 1. POPC only 2. POPC/DAG=60/6 3. POPC/DAG/GM1=60/6/20 4. POPC/DAG/PS=60/6/20 5. POPC/PS=60/20 6. POPC/GM1=60/20 Phodamine-PE is inluded all 0.5 mol%. 1. POPC(0.2micromol) avanti 13.7mM 14.6microl 2. PODG(0.033micromol) avanti 800815C 3.4 mM 9.8 microl 3. PS(0.04microl)avanti 100721 2.3mM 0.45 microl 4. GM1(0.04micromol) sigma G7641 1mM 1.128 microl 5. Phodamin-PE(1nmol) Avanti 0.15 mM 7 microl So then, I am gonna prepare following. 1. Take 102 microl POPC and 49 microl PE. 2. Mix and take 21.6 microl each in 6 tubes. 3. 9.8microl DAG is added 2,3,4 tubes. 4. 1.1microl GM1 is added 3,6 tubes. 5. 0.5microl PS is added 4,5 tubes. 09/Jan/2011 I read a paper in which they made liposomes. I will modify a little bit. And I am gonna detect FRET signal. ex 488 nm, em 560 nm. 1.POPC/BODIPYPE(530/560)=60/0.6 2.POPC only (as ctrl) 3.POPC/PS/BODIPYPE(530/560)=60/6/0.6 (positive ctrl) 4.POPC/GM1/BODIPYPE(530/560)=60/6/0.6 5.POPC/GM1=60/6 (as ctrl) Each is divided into two samples. One is for ctrl. The other is for Bc-PLC addition. 1. POPC(0.2micromol) avanti 13.7mM 14.6microl 2. BODIPYPE(530/560)(0.004micromol) Molecular probe 1 mM 2microl 3. PS(0.02microl)avanti 100721 2.3mM 0.245 microl 4. GM1(0.02micromol) sigma G7641 1mM 0.564 microl 03/Jan/2011 I did the condition of 02/Dec. But this lipid mixture did not make liposomes more than previous condition. So Next thinking is that remove cholesterol. That menas that POPC/SM/DAG=60 20 10 and so on. And I did the experiment in which I see the effect of C1AB on cell growth. MDCK and HEK cells. I cultured HEK cells as following condition. cell concentration is 1.62*106 cells/ml. 10microl solution was added to 500microl medium. After that 10microl 3.8mg/ml C1AB was added. Ctrl is only 10microl 200mM imidazole buffer solution. About HEK cells, 3.0*105 cells/ml was prepared. 30microl this solution was added to 500microl DMEM solution. After that, 25microl 3.8mg/ml C1AB solution was added. 1. POPC(0.2micromol) avanti 13.7mM 14.6microl 2. brainSM(0.066micromol) avanti 860062C 31.4mM 2.1 microl 3. chol(0.2micromol) unknown 10.2mM 19.6microl 4. PODG(0.033, 0.066micromol) avanti 800815C 3.4 mM 9.8, 19.6 microl So, I made such liposomes. 1. POPC=60 2. POPC/DAG=60/5 3. POPC/DAG=60/10 4. POPC/SM=60/20 5. POPC/SM/DAG=60/20/10 6. POPC/SM/DAG=60/20/20 02/Dec/2010 It turns out that these lipid mixture I prepared in 30/Dec did not form liposomes. So, I asked Toshi-sensei how to make liposomes well. うえだくん、 コレステロールを増やせばうまくいくかも知れません。 POPC/SM/chol/DAG=60 20 60 10とか。 試してみてもらえますか? 小林 So I made liposome as follows. 1. POPC(0.2micromol) avanti 13.7mM 14.6microl 2. brainSM(0.066micromol) avanti 860062C 31.4mM 2.1 microl 3. chol(0.2micromol) unknown 10.2mM 19.6microl 4. PODG(0.033, 0.066micromol) avanti 800815C 3.4 mM 9.8, 19.6 microl So, I made such liposomes. 1. POPC/SM/chol=60/20/60 2. POPC/SM/chol/DAG=60/20/60/10 3. POPC/SM/chol/DAG=60/20/60/20 30/Dec/2010 I prepared liposomes newly. SM was included because SM is important for distribution of DAG on the membrane. And then, I mimicked the outer leaflet of the plasma membrane. So, I used as follows 1. POPC(0.6micromol) avanti 13.7mM 43.8microl 2. brainSM(0.2micromol) avanti 860062C 31.4mM 6.3 microl 3. chol(0.2micromol) unknown 10.2mM 19.6microl 4. PODG(0.1, 0.2, 0.3,0.4 micromol) avanti 800815C 3.4 mM 29.4, 58.8,88.2,117microl So, I made such liposomes. 1. POPC/SM/chol=60/20/20 2. POPC/SM/chol/DAG=60/20/20/10 3. POPC/SM/chol/DAG=60/20/20/20 4. POPC/SM/chol/DAG=60/20/20/30 5. POPC/SM/chol/DAG=60/20/20/40 28/Dec/2010 EYFP-C1AB 1.77 mg/ml now (M.W=38,000) I took 3 microl this means 1.77 mg*3microl/1000microl=5.31 microg. So 5.31/38000=0.0001397micromol=0.1397nmol. 1 cell have 1 fmol DAG. glass base dish maybe has 10000 cells/1 well. So 1 fmol*10000=10pmol DAG. but outer DAG is less assume 1%. So 100fmol DAG. liposome 19mM DOPC 52.6microl this means 19 mmol/1000000microl*52.6microl=1micromol. 3.2mM DODG 12.5microl this means 3.2mmol/1000000microl*12.5microl=40nmol. These two are mixed, so 4%mol DAG. suspended in 200microl HBSS. 100microl picked up, means 500nmol PC 20 nmol DAG. vesicle contains two side, so 250nmol PC 10nmol DAG I did liposome experiment, but result is mysterious. In the presence of DAG in PC liposome, fluorescence light is brighter than that in the presence of only PC liposome. I think about this. Basically, I don t know what happen, but there is some hint. 1. cells were ripped off when both liposome was added, this means that PC works as detergent because I add a lot of liposome, 500 nmPC. So I need to reduce the amount of PC liposome. 2. In this experiment, I add 4mol% DAG in PC liposome. But other experiment, for example SM-lysenin, give 20mol% DM into PC liposome. So I can add more DAG, maybe at least 10%, possbly 20%-40%. As you know, If DAG included more, this membrane doesn t make a liposome. So I need to take care about it. Next time, I am goning to prepare the liposome, リポソームですが、1mMを1ml位用意して、 蛋白の濃度にもよると思いますが、 こちらの実験では、GFP-Lysの場合、 いつも、50倍希釈で染色しているので、 (1マイクロ/50マイクロPBS) 1マイクロに、50マイクロのリポソームを混ぜて、 37度で30分してから、それで染色していました。 1mMはかなり濃い濃度なので、タンパク質はすべて 結合すると考えています。 さっき探していた論文ですが、(準備中) For the preabsorption experiment, Dronpa-θ-D4 or Dronpa-NT-Lys was incubated with MLVs at 37°C for 30 min prior to apply them to HeLa cells. としか書いてありませんでした。 これで良いですか? 牧野 Reply Forward Reply |Ueda Yoshibumi to Asami show details Dec 17 (7 days ago) リポソームを作るとき、はじめに、クロロホルムに溶けた脂質を遠沈管の中に加えて、 窒素で飛ばしてからPBSなどを加えてベシクルにするんだよね? だいたい、クロロホルムに溶けた1mM脂質(例えばDOPC)を何μl位遠沈管に入れて乾かしていますか? それは脂質のストック濃度によると思います。 10mMの脂質ストックなら100ulだし、20mMなら50です。 それで乾いてから1mlのPBSをいれて、 最終濃度1mMリポソームが 1mlできるということです。 Show quoted text - Reply Forward Reply |Ueda Yoshibumi to Asami show details Dec 17 (7 days ago) 1mMだったら脂質を1ml入れているっていうことだね。 かなり多い量を加えているんだね! なるほど、わかりました。 Reply |Asami Makino to Ueda show details Dec 17 (7 days ago) でも、結局リポソームは50マイクロLとか使わないから、 1mlも作る必要ないと思う。 200マイクロでも作れば充分なんじゃないかな。 ただ、こちらにある脂質のストックはほとんど10mM以上あるので たくさんある脂質は少量はかり取るのが大変だから、 たくさん使ってもいいと思います。 Original Message ----- From Ueda Yoshibumi To Asami Makino Show quoted text - Sent Friday, December 17, 2010 3 31 PM Subject Re MLV なるほど、了解しました! So, I prepared vesicles. I use 10microg/ml YFP-C1AB to stain the cells. YFP-C1AB M.W. 38kDa=38,000 This means 0.000263micromol/ml I add 100microl, So total amount is 0.02nmol. I want to include DAG into the vescle And then, 1 cells has 1 fmol DAG. glass based dishes is maybe 10 pmol DAG.
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秘密のケンミンSHOW 極 秘密のケンミンSHOW 極 2021年10月~21年12月 共通事項 放送時間…木曜21 00~21 54 絨毯の上に 再春館製薬所 以外カラー表記 備考 2021年10月7日、2021年10月21日、2021年11月11日は休止 2021年10月14日は3時間SP(19時56分~22時54分) 2021年11月18日は2時間SP(21時00分~22時54分) 固定スポンサー YOKOHAMA YAMADA 小林製薬 TOYOTA 都道府県民共済 Panasonic P G SUZUKI セブン アイHLDGS.(セブン-イレブン) amazon DAIHATSU 再春館製薬所 アート引越センター 2021年10月28日 0’30”…YOKOHAMA、YAMADA、小林製薬、TOYOTA、都道府県民共済、Panasonic、P G、SUZUKI、セブン アイHLDGS.(セブン-イレブン)、amazon、DAIHATSU、再春館製薬所、アート引越センター、SUNTORY 2021年11月4日 0’30”…TOYOTA、小林製薬、YAMADA、YOKOHAMA、Panasonic、都道府県民共済、セブン アイHLDGS.(セブン-イレブン)、SUZUKI、再春館製薬所、アート引越センター、amazon、住友生命、P G、DAIHATSU 2021年11月25日 0’30”…都道府県民共済、Panasonic、アート引越センター、SUZUKI、セブン アイHLDGS.(セブン-イレブン)、amazon、再春館製薬所、DAIHATSU、東芝ライフスタイル、TOYOTA、YAMADA、小林製薬、YOKOHAMA、P G 2021年12月2日 0’30”…Panasonic、P G、SUZUKI、セブン アイHLDGS.(セブン-イレブン)、DAIHATSU、再春館製薬所、amazon、SUNTORY、アート引越センター、YOKOHAMA、YAMADA、小林製薬、TOYOTA、都道府県民共済 2021年12月9日 0’30”…P G、SUZUKI、セブン アイHLDGS.(セブン-イレブン)、amazon、再春館製薬所、DAIHATSU、第一三共ヘルスケア、アート引越センター、Panasonic、YOKOHAMA(白帯)、小林製薬(白帯・番組コラボCM)、YAMADA、都道府県民共済、TOYOTA 2021年12月16日 0’30”…SUZUKI、セブン アイHLDGS.(セブン-イレブン)、amazon、再春館製薬所、DAIHATSU、アート引越センター、P G、YAMADA、小林製薬、TOYOTA、都道府県民共済、Panasonic、YOKOHAMA、SUBARU(PT)
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元ネタ語録 秘密のケンミンshow(2008年7月25日放送) エアもんた「もう抑えるだけ抑えられてて終わったらパーン」 清水ミチコ「いいこと言うねぇ・・・」 リア本「もうパーンが好きだから、パーンしかないから」 エア土「仕事仕事に縛られて終わったらパーン」 エアもんた「パーン」 一同大爆笑
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SUPERJUNIORをお気に入りに追加 SUPERJUNIORとは SUPERJUNIORの52%は利益で出来ています。SUPERJUNIORの21%は明太子で出来ています。SUPERJUNIORの11%はツンデレで出来ています。SUPERJUNIORの10%は心の壁で出来ています。SUPERJUNIORの6%は厳しさで出来ています。 SUPERJUNIORの報道 東方神起・SHINee・NCT・aespaら「SMTOWN」元日に無料オンコン アルバムもリリース<SMTOWN 2022:SMCU EXPRESS> - モデルプレス SJ イェソン『私たち家族になりました』出演‥初めての出会い→結婚へ? - DANMEE ダンミ - ダンミ ソン・ジュンギ&チョ・ジョンソクらK-POPの祭典「MAMA」プレゼンターに(cinemacafe.net) - Yahoo!ニュース - Yahoo!ニュース SUPERJUNIOR ウニョク演出 オフ・ブロードウェイミュージカル『ALTARBOYZ』 世界のファンと出会う!キャラクター別ポスター公開! - Dream News [ディレイ・ビューイング]SUPER JUNIOR-D&E COUNTDOWN IN JAPAN開催決定! - PR TIMES 「SUPER JUNIOR」イトゥク、“帯状疱疹になった…新型コロナのワクチンのせいかも” - WOW! Korea SUPER JUNIOR、デビュー16周年記念パーティーを本日開催…メンバーらが屋根裏部屋に集合 - Kstyle SUPER JUNIOR-D&E、1stフルアルバム「COUNTDOWN」の制作記を盛り込んだドキュメンタリー映像を公開(Kstyle) - Yahoo!ニュース - Yahoo!ニュース 「SUPER JUNIOR」シウォン、ハロウィンにバットマンに変身!!…“Trick or treat!” - WOW! Korea SUPER JUNIOR-D&E、1stフルアルバム「COUNTDOWN」トラックリスト公開…全10曲を収録 - Kstyle 「SUPER JUNIOR」ヒチョル、SMエンタからプレゼントされた「イカゲーム」で話題のタルゴナを認証(動画あり) - WOW! 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※0 59~ 【曲名】 合法的トビ方ノススメ -SPARK!!SOUND!!SHOW!!ブチ上げ♂ Cherry boy REMIX!!!!」 【アーティスト】 Creepy Nuts (R-指定 DJ松永) 【歌詞】 【作詞】 R-指定 【作曲】 DJ松永 【編曲】 【作品】 ニンジャスレイヤー フロムアニメイシヨン スペシャル・エディシヨン版 【メディア】 TVアニメ 【テーマ】 エンディングテーマ 【初出】 2016年 【備考】 TVシリーズ11話EDに起用された現役最強バトルMC・R-指定&日本No.2 DJ松永によるロック臭溢れる強烈レアトラック。 オリジナル
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UPROJECT 第一回公演 庭にはニワトリ二羽にワニ キニサクハナノナ 作 小川 未玲 / 演出 ニワ フミオ 出演(ダブルキャスト出演者一覧はページ下) 庭にはニワトリ二羽にワニ 小木曽 まいこ (大夢プロ) 正手 道隆 (あおきりみかん) 《ダブルキャスト》) 石本 幸裕 (舞夢プロ) 《ダブルキャスト》 松野 有加里 (あおきりみかん) 《ダブルキャスト》 田中 里実 (舞夢プロ) 《ダブルキャスト》 丹羽 文雄 キニサクハナノナ 千葉 ひとみ(NAC) 正手 道隆 (あおきりみかん) 《ダブルキャスト》 日比野 高啓 (舞夢プロ) 《ダブルキャスト》 丹羽 文雄 場所 PLAY HOUSE NEO STUDIO(プレイハイスネオスタジオ) (名古屋市西区名駅二丁目四番十号) 日程 2011年7月27日(水)~7月31日(日) 7/27(水) 19 00~ 7/28(木) 14 00~ 19 00~ 7/29(金 14 00~ 19 00~ 7/30(土) 14 00~ 19 00~ 7/31(日) 12 00~ 16 00~ 開場は開演の30分前 各公演38席限定 各回「庭にはニワトリ庭にワニ」「キニサクハナノナ」の順で上演 料金 2500円(前売り当日共) 照明 長江 慎太郎 (チェルシーとバニーガール) ↑クリックすると大きい画像が見られます↑ ダブルキャスト出演者一覧 庭にはニワトリ二羽にワニ キニサクハナノナ トサカ クロコ 桑島 正手 道隆 石本 幸裕 松野 有加里 田中 里実 正手 道隆 日比野 高啓 7/27(水) 19 00~ ○ ○ ○ 7/28(木) 14 00~ ○ ○ ○ 19 00~ ○ ○ 7/29(金) 14 00~ ○ ○ ○ 19 00~ ○ ○ ○ 7/30(土) 14 00~ ○ ○ ○ 19 00~ ○ ○ ○ 7/31(日) 12 00~ ○ ○ ○ 16 00~ ○ ○ ○
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通常放送 話数 1 2 3 4 5 1 95.1 3.0 1.1 0.4 0.4 2 94.4 3.5 0.9 0.6 0.6 3 89.9 7.7 1.4 0.6 0.4 4 95.5 3.0 0.6 0.6 0.3 5 92.9 5.0 0.8 0.5 0.8 6 95.6 2.7 0.7 0.4 0.6 7 95.4 2.9 0.7 0.4 0.6 8 93.4 3.7 1.2 0.5 1.2 9 91.3 5.5 1.3 0.7 1.2 10 94.8 3.7 0.5 0.6 0.4 11 89.7 6.1 1.6 1.4 1.2 12 84.8 8.9 3.2 1.5 1.5 平均 92.73 4.64 1.17 0.68 0.77 一挙放送 放送日 話数 1 2 3 4 5 2016/12/29 全12 92.5 5.3 1.4 0.4 0.4 2020/12/03 全12 92.6 4.6 1.5 0.7 0.6